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HRP-MAL|馬來酰亞胺修飾的辣根過氧化物酶的介紹

2025-02-24 [193]

馬來酰亞胺修飾的辣根過氧化物酶(Maleimide-modified Horseradish Peroxidase,Maleimide-HRP)是一種通過馬來酰亞胺與辣根過氧化物酶共價結(jié)合的生化試劑,以下是其詳細介紹:

結(jié)構(gòu)特點

馬來酰亞胺修飾的辣根過氧化物酶是通過馬來酰亞胺基團與HRP中的半胱氨酸殘基反應(yīng),生成穩(wěn)定的共價硫醚鍵而制得的。馬來酰亞胺通常用于與含巰基(-SH)的分子反應(yīng),因此它可以與蛋白質(zhì)中的半胱氨酸殘基發(fā)生特異性反應(yīng),實現(xiàn)HRP的修飾。

制備過程

  • 反應(yīng)條件:馬來酰亞胺與HRP的反應(yīng)通常在中性或略堿性的環(huán)境中進行,以優(yōu)化馬來酰亞胺與巰基的反應(yīng)。反應(yīng)溫度通常在室溫或低溫下,以避免酶的降解或其他副反應(yīng)。

  • 混合反應(yīng):將馬來酰亞胺試劑溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?,并與含有巰基的HRP溶液混合。在適當(dāng)?shù)臈l件下進行反應(yīng),確保馬來酰亞胺充分標(biāo)記HRP。

  • 純化:反應(yīng)完成后,通過色譜法、透析等方法去除未反應(yīng)的馬來酰亞胺分子和其他雜質(zhì),獲得純凈的馬來酰亞胺修飾的HRP。

功能與應(yīng)用

  • 功能:馬來酰亞胺修飾的辣根過氧化物酶繼承了HRP的催化功能,能夠催化過氧化氫與各種底物的反應(yīng),產(chǎn)生可檢測的顏色變化。

  • 應(yīng)用

    • 抗體標(biāo)記:馬來酰亞胺修飾的HRP可以與抗體等生物分子共價結(jié)合,用于制備抗體標(biāo)記物。在免疫印跡(Western blot)、ELISA等實驗中,這些標(biāo)記物能夠產(chǎn)生可檢測的信號,用于目標(biāo)分子的檢測和定位。

    • 生物傳感器:修飾后的HRP可用于構(gòu)建生物傳感器,用于檢測過氧化氫或其他底物的含量。

    • 信號放大工具:馬來酰亞胺修飾的HRP能夠在多種檢測系統(tǒng)中作為信號放大工具,廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、診斷以及各種分析檢測中。

注意事項

  • 純度與驗證:馬來酰亞胺修飾的HRP的純度對實驗結(jié)果至關(guān)重要。通常需要通過紫外-可見光吸收光譜或其他方法檢測修飾是否成功,并確保產(chǎn)品的純度滿足實驗要求。

  • 儲存條件:馬來酰亞胺修飾的HRP應(yīng)在冷藏條件下保存,避免長時間暴露于高溫或光照條件下,以保持其活性和穩(wěn)定性。

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